EB病毒和人乳头状瘤病毒感染与鼻、副鼻窦内翻性乳头状瘤的关系
作者：高鹏飞 陈文弦 肖乐义 阎小君
单位：高鹏飞 陈文弦(第四军医大学唐都医院耳鼻喉科 西安 710038)；肖乐义 阎小君(全军基因诊断技术应用研究所)
关键词：鼻肿瘤；鼻窦肿瘤；乳头状瘤病毒人；EB病毒
肿瘤000433 中图分类号：R739.62 文献标识码：B 文章编号：1000-7431(2000)04-0268-01
鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤(简称SNIP)病因仍不十分清楚，近年许多研究表明人乳头状瘤 病毒(HPV) 是其主要病因，但HPV的致癌作用也有赖于一些触发因素的协同作用(如吸烟、环境因素、慢 性炎症的刺激和其他病毒感染等)。本文对随访的30例SNIP石蜡包埋组织标本进行PCR检测HP V和EB病毒基因，分析病因和复发癌变的关系。
, http://www.100md.com 材料和方法
1 病例和组织标本
本院及延安医学院第二附属医院1985年～1995年以来收治的鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤住 院病例共41例。可分析者30例。本组男21例，女9例，男女比 为2.3∶1；平均年龄49.5岁(17～70岁) ；另以10例鼻息肉标本作为对照。
2 模板DNA的制备
取5 μm厚石蜡切片2～4片。HPV16质粒和EBV阳性的B95-8细胞系DNA按常规方法提取。
3 聚合酶链反应(PCR)
(1)检测EBV的反应体系含10×buffer 4 μl，10 mmol/L dNTP0.3 μl，引物各0.8 μmol / L，模板4 μl，Taq DNA聚合酶2 μ，高纯水加至30 μl。引物序列分别为5’-GC GGAGAGGTAAGTGGAC TTT-3’(1398-1418)和5’-TGGAGAGG TCAGGTTACTTA-3’(1639-1620)， 扩增产物位 于Ba mHI-W区段内242 bp；扩增条件为94℃变性60 s，63℃退火90s，72℃延伸120s共循环36 次 。
, http://www.100md.com
(2)检测HPV通用型(含6，11，16，18，33型)反应体系为10×buffer 4 μl，mmol/LdNTP 0 .3μ l，引物各0.5 μmol/L，模板4 μl，TaqDNA聚合酶1 U，高纯水加至30 μl。引物序列分 别为5’-GCACCAGGGATCAT AACTAATGG-3’和5’-CGTCCACAAGAGGGAATACTGATC-3’，扩增产物位于L1区448～454 bp。反应条件为94 ℃变性45 s，55 ℃退火60 s，72 ℃延伸60 s，共循环35次。(以上引物、HPV质粒及B95-8细胞系由全军基因诊断技术应用研究所提供)。
(3)结果判断 取扩增产物10 μl加溴酚蓝2 μl，以PCR Marker作DNA标准分子量对照，点样于2%琼脂糖凝胶，50 V电压下电泳50 min，溴化乙锭染色，紫外光下观察结果。每份标本扩增3次，如电泳条带弱无法判断结果，可取扩增产物3 μl作为模板，用两温度点法(94 ℃变性50 s，68 ℃退火一延伸1 min)行二次扩增，仍无明显条带者判为阴性。
, http://www.100md.com
结果
1 聚合酶链反应结果
30例SNIP及恶变组织中检出HPV 20例(66.7 %)、EBV 12例(40 %)。其中21例鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤中检出HPV单独感染11例，EBV单独感染3例，HPV 和EBV混合感染4例；9例乳头瘤恶变中检出两者混合感染1例，HPV单独感染4例(全部为HPV16型，EBV单独感染4例，即乳头状瘤恶变中100 %存在一种或两种肿瘤病毒的感染；10例鼻息肉中未检出HPV和EBV。
2 本组30例内翻性乳头状瘤中有13例复发2次以上，复发率42.5 %；17例未复发。复发和未复发者HPV的感染分别为8例(61.5%)和11例(64.7 %)，EBV的感染分别为6例(46.2%)和1例(5.9 %)，EBV感染率在发病例中明显高于未复发病例P<0.05)。9例发生癌变(癌变者平均年龄58.2岁)，癌变率30 %；19例有慢性鼻炎病史。
, 百拇医药
讨论
SNIP虽属良性，但可破坏周围软组织和骨质，切除后易复发，并有较高的恶变率，故有人将其归属于良性与恶性之间的边缘性肿瘤、癌前状态、或潜伏恶性肿瘤。1987年Syrjantn等首次用原位杂交方法从SNIP中检出了HPV基因。以后研究都支持HPV感染是SNIP的病因之一，Macdonald等用PCR和Southern杂交法首次从20例鼻SNIP中检出HPV 9例，EBV 13例，提出EBV有可能象HPV一样作为内翻性乳头状瘤的病因，或起到协同作用。而Gafley等认为内翻性乳头状瘤可能与EBV无关。本研究30例SNIP中HPV和EBV的感染率分别为66.7 %和40 %，其中5例为两者混合感染，而10例鼻息肉中未检出HPV和EBV。提示肉翻性乳头状瘤与HPV感染有关，很可能与EBV也有关。本文中9例乳头状瘤恶变中检出HPV阳性5例，且全部为HPV16型，说明HPV16型与乳头状瘤恶变有关，与以往研究结果一致。
有关HPV与SNIP复发的关系尚有争论。本组的复发和未复发者中HPV的感染率接近，而EBV的感染率在复发者中明显高于未复发，说明EBV在内翻性乳头状瘤的复发中起一定的作用。
作者简介：高鹏飞，男，硕士，讲师。
(收稿：1999-02-19，修回：1999-05-6), 百拇医药
单位：高鹏飞 陈文弦(第四军医大学唐都医院耳鼻喉科 西安 710038)；肖乐义 阎小君(全军基因诊断技术应用研究所)
关键词：鼻肿瘤；鼻窦肿瘤；乳头状瘤病毒人；EB病毒
肿瘤000433 中图分类号：R739.62 文献标识码：B 文章编号：1000-7431(2000)04-0268-01
鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤(简称SNIP)病因仍不十分清楚，近年许多研究表明人乳头状瘤 病毒(HPV) 是其主要病因，但HPV的致癌作用也有赖于一些触发因素的协同作用(如吸烟、环境因素、慢 性炎症的刺激和其他病毒感染等)。本文对随访的30例SNIP石蜡包埋组织标本进行PCR检测HP V和EB病毒基因，分析病因和复发癌变的关系。
, http://www.100md.com 材料和方法
1 病例和组织标本
本院及延安医学院第二附属医院1985年～1995年以来收治的鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤住 院病例共41例。可分析者30例。本组男21例，女9例，男女比 为2.3∶1；平均年龄49.5岁(17～70岁) ；另以10例鼻息肉标本作为对照。
2 模板DNA的制备
取5 μm厚石蜡切片2～4片。HPV16质粒和EBV阳性的B95-8细胞系DNA按常规方法提取。
3 聚合酶链反应(PCR)
(1)检测EBV的反应体系含10×buffer 4 μl，10 mmol/L dNTP0.3 μl，引物各0.8 μmol / L，模板4 μl，Taq DNA聚合酶2 μ，高纯水加至30 μl。引物序列分别为5’-GC GGAGAGGTAAGTGGAC TTT-3’(1398-1418)和5’-TGGAGAGG TCAGGTTACTTA-3’(1639-1620)， 扩增产物位 于Ba mHI-W区段内242 bp；扩增条件为94℃变性60 s，63℃退火90s，72℃延伸120s共循环36 次 。
, http://www.100md.com
(2)检测HPV通用型(含6，11，16，18，33型)反应体系为10×buffer 4 μl，mmol/LdNTP 0 .3μ l，引物各0.5 μmol/L，模板4 μl，TaqDNA聚合酶1 U，高纯水加至30 μl。引物序列分 别为5’-GCACCAGGGATCAT AACTAATGG-3’和5’-CGTCCACAAGAGGGAATACTGATC-3’，扩增产物位于L1区448～454 bp。反应条件为94 ℃变性45 s，55 ℃退火60 s，72 ℃延伸60 s，共循环35次。(以上引物、HPV质粒及B95-8细胞系由全军基因诊断技术应用研究所提供)。
(3)结果判断 取扩增产物10 μl加溴酚蓝2 μl，以PCR Marker作DNA标准分子量对照，点样于2%琼脂糖凝胶，50 V电压下电泳50 min，溴化乙锭染色，紫外光下观察结果。每份标本扩增3次，如电泳条带弱无法判断结果，可取扩增产物3 μl作为模板，用两温度点法(94 ℃变性50 s，68 ℃退火一延伸1 min)行二次扩增，仍无明显条带者判为阴性。
, http://www.100md.com
结果
1 聚合酶链反应结果
30例SNIP及恶变组织中检出HPV 20例(66.7 %)、EBV 12例(40 %)。其中21例鼻腔、副鼻窦内翻性乳头状瘤中检出HPV单独感染11例，EBV单独感染3例，HPV 和EBV混合感染4例；9例乳头瘤恶变中检出两者混合感染1例，HPV单独感染4例(全部为HPV16型，EBV单独感染4例，即乳头状瘤恶变中100 %存在一种或两种肿瘤病毒的感染；10例鼻息肉中未检出HPV和EBV。
2 本组30例内翻性乳头状瘤中有13例复发2次以上，复发率42.5 %；17例未复发。复发和未复发者HPV的感染分别为8例(61.5%)和11例(64.7 %)，EBV的感染分别为6例(46.2%)和1例(5.9 %)，EBV感染率在发病例中明显高于未复发病例P<0.05)。9例发生癌变(癌变者平均年龄58.2岁)，癌变率30 %；19例有慢性鼻炎病史。
, 百拇医药
讨论
SNIP虽属良性，但可破坏周围软组织和骨质，切除后易复发，并有较高的恶变率，故有人将其归属于良性与恶性之间的边缘性肿瘤、癌前状态、或潜伏恶性肿瘤。1987年Syrjantn等首次用原位杂交方法从SNIP中检出了HPV基因。以后研究都支持HPV感染是SNIP的病因之一，Macdonald等用PCR和Southern杂交法首次从20例鼻SNIP中检出HPV 9例，EBV 13例，提出EBV有可能象HPV一样作为内翻性乳头状瘤的病因，或起到协同作用。而Gafley等认为内翻性乳头状瘤可能与EBV无关。本研究30例SNIP中HPV和EBV的感染率分别为66.7 %和40 %，其中5例为两者混合感染，而10例鼻息肉中未检出HPV和EBV。提示肉翻性乳头状瘤与HPV感染有关，很可能与EBV也有关。本文中9例乳头状瘤恶变中检出HPV阳性5例，且全部为HPV16型，说明HPV16型与乳头状瘤恶变有关，与以往研究结果一致。
有关HPV与SNIP复发的关系尚有争论。本组的复发和未复发者中HPV的感染率接近，而EBV的感染率在复发者中明显高于未复发，说明EBV在内翻性乳头状瘤的复发中起一定的作用。
作者简介：高鹏飞，男，硕士，讲师。
(收稿：1999-02-19，修回：1999-05-6), 百拇医药